FastPure®  Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit

細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒 (DC102)

簡(jiǎn)單快速 組織全部消化后，1 h內(nèi)即可獲得超高純度的基因組DNA

適應(yīng)性廣 適用多種動(dòng)物組織、培養(yǎng)的細(xì)胞、唾液、牛奶等液體樣本

純度高 獲得的 DNA 純度高，可直接用于 PCR、文庫(kù)構(gòu)建等分子實(shí)驗(yàn)

安全性高 無需添加酚氯仿等有機(jī)溶劑 分別選用小鼠肝臟 / 尾尖 / 肺 / 肌肉 / 脾臟 / 腎臟 / 心臟 / 腦進(jìn)行基因組 DNA 提取，瓊脂糖凝 膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103)

保存條件：本產(chǎn)品除 Proteinase K 和 RNase Solution 外的其他組分于 15℃ ~25℃保存  Proteinase K 干粉和 RNase Solution 可室溫運(yùn)輸，收到產(chǎn)品后請(qǐng)保存于 -20℃。溶解后的 Proteinase K 溶液請(qǐng)分裝保存于 -20℃

產(chǎn)品概述

本試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，提取過程中無需使用酚 / 氯仿有機(jī)溶劑抽提、醇類沉淀，僅需 30 min-60 min 即可得到高純度、高產(chǎn)量基因組 DNA，后續(xù)可直接用于酶切反應(yīng)、PCR、qPCR、文庫(kù)構(gòu)建及 Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

性能展示

分別選用小鼠肝臟 / 尾尖 / 肺 / 肌肉 / 脾臟 / 腎臟 / 心臟 / 腦進(jìn)行基因組 DNA 提取，瓊脂糖凝 膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103)

操作流程概要

適用范圍

1-20 mg 動(dòng)物組織 / ＜ 5 × 106 培養(yǎng)細(xì)胞 / 液體樣本

組分

自備材料

1.5 ml 滅菌離心管，無水乙醇，水浴鍋。

△ Washing Buffer A 和 Washing Buffer B 需在使用前添加一定量的無水乙醇

樣本制備

動(dòng)物組織

1.向 1-20 mg 剪碎或研磨的組織 ( 肝臟 、脾臟及腎臟小于 10 mg ) 中加入 230 µl Buffer GA 和 20 µl PK 工作液 ，渦旋混勻。

樣品過量會(huì)降低 DNA 產(chǎn)量和純度。肝臟、脾臟及腎臟等樣品富含 DNA，取樣應(yīng)小于 10 mg。肌肉和皮膚等樣品 DNA 含量低的組織，取樣可擴(kuò)大至 20-50 mg，同時(shí)按比例增加 Buffer GA，Buffer GB 和無水乙醇的用量。

2.55°C水浴至組織全部酶解。

▲ 消化期間可顛倒混勻數(shù)次以促進(jìn)酶解過程。組織塊盡量剪碎以縮短消化時(shí)間。消化時(shí)間取決于樣品的類型和勻漿效果。一般組織樣品需 0.5-3 h，鼠尾需 6-8 h 或消化過夜。

▲ 若消化液比較渾濁或存在明顯的顆粒，12,000 x g 離心 3 min，轉(zhuǎn)移上清液至新的 1.5 ml 離心管中。
3.（可選）若RNA殘留對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響較大，加入10ulRNase Solution至消化液中，顛倒混勻，室溫或37°C放置15-60min。
▲ RNA 消化時(shí)間取決于樣品類型。肝臟和腎臟富含 RNA，可延長(zhǎng)消化時(shí)間至 60 min。
4.加入250 µl Buffer GB至消化液中，最高速度渦旋混勻 20 sec，70℃水浴 10 min。

培養(yǎng)細(xì)胞

1.400 x g 離心 5 min 收集細(xì)胞，棄上清液。加入 220 µl PBS 、10 µl RNase Solution 和 20 µl PK 工作液至樣品中，重懸細(xì)胞。室溫靜置 15 min 以上。

▲ 細(xì)胞總量不可超過 5×106 個(gè)。

2.加入 250 µl Buffer GB 至細(xì)胞重懸液中，渦旋混勻。65℃水浴 15-30 min。

提取流程

FastPure®  Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit

細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒 (DC103)

得率高，完整性好 提取的基因組DNA產(chǎn)量高，且完整性好

純度高 獲得的 DNA 純度高，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)

安全性高 無需添加酚氯仿等有機(jī)溶劑

保存條件 :RNase A 及 Proteinase K 干粉于 -30℃ ~ -15℃保存，其他組分常溫 (15℃ ~ 25℃ ) 保存

產(chǎn)品概述

本試劑盒主要適用于從各種來源的細(xì)菌（革蘭氏陰性、革蘭氏陽性）培養(yǎng)液中提取基因組 DNA。試劑盒采用硅膠膜純化技術(shù)，提取過程中無需 使用酚氯仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，并最大限度的去除 RNA，雜蛋白、脂類及其他抑制性雜質(zhì)。提取的基因組 DNA 純度高， 質(zhì)量穩(wěn)定，可用于酶切、PCR、Southern 雜交等下游實(shí)驗(yàn)。一般情況下，得到的 DNA 包括有基因組 DNA 和質(zhì)粒 DNA。

性能展示

產(chǎn)量高、完整性好

使用細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒（Vazyme #DC103）以及市售其他品牌細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒（分別來自 Supplier T、C、O），提取不 同來源的細(xì)菌基因組 DNA。 起始量：金黃色葡萄球菌（4.0×108 cells），大腸桿菌 DH5α（4.5×108 cells），大腸桿菌 Fast T1（4.5×108 cells），洗脫體積 70 μl，DNA 上 樣量 2 μl。瓊脂糖凝膠濃度為 1%。 M：DL 15000 DNA Marker ( Vazyme #MD103 )

純度高

分別使用 Vazyme #DC103 與 T 公司相關(guān)產(chǎn)品提取等起始量大腸桿菌 DH5α 的基因組 DNA，通過 OneDrop 測(cè)定基因組 DNA 的濃度與純度。 可以看出 Vazyme #DC103 的純度更高。

操作流程概要

適用范圍

細(xì)菌（革蘭氏陰性、革蘭氏陽性）

組分

自備材料

Lysozyme（Vazyme #DE103）（革蘭氏陽性菌），無水乙醇，1.5 ml 離心管，水浴鍋或金屬浴。
△ Buffer PB 和 Buffer PW 需在使用前添加一定量的無水乙醇

樣本制備

革蘭氏陰性菌

1.取細(xì)菌培養(yǎng)液 1 - 5 ml（小于 1.0 × 109 個(gè)細(xì)菌），10,000 rpm (~11,500 × g) 離心 1 min，倒棄培養(yǎng)液。

細(xì)菌數(shù)量可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量，1OD600 約為 1.5 × 109 個(gè)細(xì)菌。

2.加入 230 μl Buffer GA，振蕩至菌體全部懸浮。

3. ( 可選 ) 若 RNA 殘留對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響較大，加入 4 μl RNase A 至消化液中，振蕩 15 sec，室溫放置 5 - 15 min。  

4.加入 20 μl Proteinase K，振蕩混勻。  

5.加入 250 μl Buffer GB，振蕩混勻，70℃水浴 10 min。    

加入 Buffer GB 可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若溶液未變清亮， 說明細(xì)胞只有部分裂解，可能會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 量少且不純。

革蘭氏陽性菌

1.取細(xì)菌培養(yǎng)液 1 - 5 ml（小于 1.0 × 109 個(gè)細(xì)菌），10,000 rpm (~11,500 × g) 離心 1 min，倒棄培養(yǎng)液。

細(xì)菌數(shù)量可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量，1OD600 約為 1.5 × 109 個(gè)細(xì)菌。

2.加入 180 μl Lysozyme（自備），振蕩使菌體重懸，37℃水浴 30 min。

大部分細(xì)菌水浴30 min后已充分破壁，但是某些細(xì)胞壁較厚的細(xì)菌（比如金黃色葡萄球菌）需要處理 1 - 2 h才能全部破壁。請(qǐng)根據(jù)不同類別的細(xì)菌，適當(dāng)調(diào)整水浴時(shí)間。  ▲ Lysozyme干粉需在緩沖液中進(jìn)行配制，否則會(huì)導(dǎo)致其沒有活性，其工作終濃度為20 mg/ml。  具體工作緩沖液配制方法為：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2 -EDTA；1.2 % Triton X-100。

3. ( 可選 ) 若 RNA 殘留對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響較大，加入 4 μl RNase A 至消化液中，振蕩 15 sec，室溫放置 5 - 15 min。

4.加入20 μl Proteinase K，振蕩混勻。

5.加入250ul Buffer GB,振蕩混勻，70°C水浴10min。

加入 Buffer GB 可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若溶液未變清亮，說明細(xì)胞只有部分裂解，可能會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 量少且不純。

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