1.Marker相關(guān)問題

1.1Marker 不直，偏斜或拖尾

原因：

1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換；

3.電壓太高，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻；

4.電泳槽的電極歪斜；

1.2Maker 跑不開

原因：

1.膠濃度太大；

2.電泳時(shí)間太短；

2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問題

2.1沒條帶

原因：

沒跑出來

2.2條帶微弱

原因：

1.DNA降解

2.上樣量過少

3.沒跑出來，產(chǎn)物濃度過低，需再次PCR

2.3非特異性擴(kuò)增

原因：

1.引物設(shè)計(jì)不合理。需重新設(shè)計(jì)引物，balst檢測(cè)引物特異性；

2.試劑被污染。包括水，酶，引物等。重新更換；

3.退火溫度太高。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數(shù)；

4.酶加入過多；

2.4 PCR產(chǎn)物彌散，拖尾或偏斜，Maker正常

原因：

1. 引物保存不當(dāng)，降解。重新配制引物工作液。

2.模板降解或過量。重新檢查模板質(zhì)量，減少模板用量。

3.非特異性擴(kuò)增。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數(shù)。

4.酶量過多或酶的質(zhì)量差。

5. 有蛋白和鹽的污染。

2.5 PCR產(chǎn)物和Maker 都彌散或拖尾

原因：

1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換。

3.電壓太高，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻。

2.6 PCR產(chǎn)物與目的大小不符合

原因：

1.引物特異性不好。需重新設(shè)計(jì)引物，balst檢測(cè)引物特異性。

2.存在新的異構(gòu)體。

3.是目的基因，但大小有差異（我遇到過）。膠回收過后再次電泳條帶變?yōu)檎４笮?。遇到這個(gè)情況可以測(cè)序看看結(jié)果。

2.7 電泳孔亮

原因：有蛋白或者多糖的污染，這些大分子物質(zhì)影響了DNA或RNA的出孔，使其停留在孔中或者出孔很慢。導(dǎo)致孔以及接近孔的位置很亮。

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