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小鼠皮膚冷凍包埋實驗步驟

發(fā)布時間： 2021-12-12　　點擊次數(shù)： 5142次

簡介

對皮膚的冷凍切片進行油紅 0 染色可以分析皮脂腺的油脂分泌功能和皮下脂肪層的形態(tài)，常用于小鼠皮膚炎癥及皮脂腺相關研究。

材料與儀器

器材：液氮、鋁箔、解剖工具、小鼠等
試劑：
① 多聚甲醛（Sigma-Aldrich）
② 冷凍包埋劑

步驟

小鼠皮膚冷凍包埋實驗的基本過程可分為如下幾步：
A. 對小鼠處以安樂后，從背部剪下方形皮膚組織，將該皮膚貼到干凈的濾紙上，用至少 20 倍體積的 4％多聚甲醛固定過夜（20 小時，＜ 24 小時）。注意：把皮膚貼到濾紙上時，用鑷子輕輕把皮膚展開，既不要留下皺褶，也不要太用力拉扯而使組織結構變形。
B. 將固定好的皮膚放入裝有蒸餾水的 50 ml 試管中進行清洗，清洗過程中可以將試管放于脫色搖床上，用較低的速度輕輕搖動約 30 分鐘。
C. 將清洗完畢的皮膚放入至少 20 倍皮膚體積的 30％的蔗糖溶液（溶于 PB）中，放置于 4 ℃，直到組織下沉到管底。
D. 將鋁箔疊成小槽子，加入適量冷凍包埋劑。將皮膚組織從蔗糖溶液中取出，先用包埋劑包裹潤濕兩遍，以去掉原來的水相，再把組織放入小槽子，調整好方向。
E. 馬上小心地把小槽子的底部浸入預先準備好的液氮中，注意不要使組織的方向改變。等包埋劑凝固后，把組織塊保存在 -20 ℃ 或 -80 ℃。切片可用于油紅染色或免疫熒光。

注意事項

1. 固定液的選擇應該根據(jù)具體的實驗要求確定。多聚甲醛是很常用的固定液，適合進行免疫組化，免疫熒光等方面的實驗；如果只是進行形態(tài)的觀察（HE 染色），可以選用 Bouin 固定液；如果要進行電鏡分析的小體積樣品，則建議采用戊二醛進行固定。
2. 當組織在蔗糖溶液中剛沉下時，即可包埋。
3. 包埋時要用細鑷子小心調整包埋方向，以便今后切片能切到完整的毛囊。

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